<code id='89EBB13BB5'></code><style id='89EBB13BB5'></style>
    • <acronym id='89EBB13BB5'></acronym>
      <center id='89EBB13BB5'><center id='89EBB13BB5'><tfoot id='89EBB13BB5'></tfoot></center><abbr id='89EBB13BB5'><dir id='89EBB13BB5'><tfoot id='89EBB13BB5'></tfoot><noframes id='89EBB13BB5'>

    • <optgroup id='89EBB13BB5'><strike id='89EBB13BB5'><sup id='89EBB13BB5'></sup></strike><code id='89EBB13BB5'></code></optgroup>
        1. <b id='89EBB13BB5'><label id='89EBB13BB5'><select id='89EBB13BB5'><dt id='89EBB13BB5'><span id='89EBB13BB5'></span></dt></select></label></b><u id='89EBB13BB5'></u>
          <i id='89EBB13BB5'><strike id='89EBB13BB5'><tt id='89EBB13BB5'><pre id='89EBB13BB5'></pre></tt></strike></i>

          APP推广合作
          联系“鸟哥笔记小乔”
          型油酰转甘蓝功能的克移酶验证一菜乙基因隆及
          2025-05-13 07:32:49

          随着人们生活质量的甘蓝功提高和对食品营养保健功能认识的加强,我国食用植物油的需求不断增加,油菜是我国重要的油料和经济作物之一,菜籽油不仅富含人体所必需的氨基酸和脂肪酸,而且能较长时间地储存,为了更好地满足广大人民对优质食用植物油的需求,菜籽油品质改良已成为当前油菜育种领域的热点。

          菜籽油的型油酰转主要成分是脂肪酸,油脂的优劣由脂肪酸决定,而油脂脂肪酸的好坏则主要取决于其碳氢链饱和程度。脂肪酸根据碳氢链饱和与不饱和分为3类:饱和脂肪酸(主要有棕榈酸、菜乙硬脂酸等)、移酶验证单不饱和脂肪酸(油酸、基因芥酸等)和多不饱和脂肪酸(亚油酸、隆及亚麻酸等),甘蓝功有研究表明,预防冠心病的指导方针集中在将饮食中的饱和脂肪和反式脂肪转变为不饱和脂肪,饱和脂肪酸熔点较高,易凝固在血管壁上,从而导致高血压和动脉粥样硬化,且饱和脂肪酸还导致血胆固醇浓度上升,不饱和脂肪酸熔点较低,容易被人体吸收。

          本研究以湖南省水稻油菜抗病重点实验室前期对高亚麻酸甘蓝型油菜(Brassicanapus)近等基因系进行的型油酰转miRNA测序结果为基础,筛选到的与脂肪酸代谢相关的bna-miR396及其靶基因乙酰转移酶基因(Acetyltransferasegene,AT)。研究表明,菜乙AT通过催化乙酰基团从乙酰辅酶A(乙酰CoA,AcetylCoA)转移到其作用底物芳香胺及杂环胺类物质上,参与脂肪酸转化与降解,AT缺失会推迟植物开花时间并降低育性。利用同源基因克隆,移酶验证得到AT基因的2个拷贝,分别构建过表达载体与干扰载体,转化拟南芥,分析转基因拟南芥后代种子脂肪酸组成,探究该基因在脂肪酸合成过程的功能,以期促进甘蓝型油菜脂肪合成分子机理研究。

          1 材料和方法

          1.1 试验材料

          高亚麻酸甘蓝型油菜近等基因系(低亚麻酸株系575,基因亚麻酸含量为5.1%;高亚麻酸株系574,隆及亚麻酸含量9.8%),甘蓝功野生型拟南芥(WT)由湖南农业大学国家油料改良中心提供。大肠杆菌感受态DH5α,型油酰转限制性内切酶、dNTP、菜乙T4DNALigationKit购自北京擎科生物科技有限公司;pMD18-T载体由本实验室保存;pCambia1300-35s-N1、pCambia1300-RNAi载体购于上海康颜生物科技有限公司;本试验中所用到的引物均由北京擎科合成。

          1.2 AT基因克隆

          利用数据库进行检索,发现AT基因有2个拷贝,分别在A基因组和C基因组,并以此序列(GSBRNA2T00114025001、GSBRNA2T00148464001)进行后续引物设计(表1),其中5′端酶切位点前的序列用于重组连接。

          采用TransZolUP植物总RNA提取试剂盒(北京全式金)提取低亚麻酸甘蓝型油菜株系575自交授粉后20~35d混合种子总RNA,并用TransScriptOne-StepgDNARemovalandcDNASynthesisSuperMix反转录试剂盒(北京全式金)合成cDNA第一链,以此为模板,进行PCR扩增,扩增体系包含KOD-FX聚合酶1μL,2×PCRBuffer25μL,dNTP(2.5μmol/L)10μL,正反向引物各0.2μmol/L,cDNA小于500ng,用ddH2O补足至50μL。反应条件为98℃2min预变性;98℃10s,60℃30s,68℃2min,35个循环;68℃7min延伸。

          经PCR纯化回收后,与pMD18-T载体相连,转化到大肠杆菌中,由北京擎科公司进行测序。

          1.3 生物信息学分析

          用SnapGene3.2.1将克隆到的靶基因序列翻译成氨基酸,经NCBI数据库BlastP进行鉴定后,预测对应蛋白的一级结构,包括氨基酸组成、理化性质等;分别登录PredictProtein、SOPMATMHMM网站进行蛋白亚细胞定位预测、结构预测、跨膜螺旋区分析;通过SWISS-MQPEL构建蛋白三级结构模型。

          1.5 过表达载体与RNAi干扰载体构建

          用BamHI和SalI双酶切pCambia1300-35s-N1载体,胶回收,产物进行体外同源重组反应,获得重组质粒。

          用XbaI及BamHI双酶切pCambial300-RNAi载体以及各个基因的RNAi片段的PCR产物,具体方法参考刘芳等,并进行改进,胶回收后进行连接,获得重组质粒。测序检验正确后,用PstI和Sal.I双酶切重组质粒及各个基因的RNAi片段的PCR产物,再次进行连接,转化,获得最终的RNAi载体。

          将构建好的过表达载体与RNAi干扰载体转入农杆菌中,以野生型拟南芥为受体,进行基因转化,获得T0种子;用潮霉素筛选T0拟南芥阳性苗并种植,之后,用PCR鉴定转基因苗,收取得到T1种子。

          1.6 脂肪酸成分测定

          采用SP-6890型气相色谱仪、FID检测器、N3000色谱工作站、毛细管色谱柱DB-23对转基因拟南芥T1种子进行脂肪酸成分测定,对7个主要的脂肪酸成分进行分析,测定时取5个转基因后代株系,每个材料检测约30粒种子。

          2 结果与分析

          2.1 靶基因与特异干扰片段克隆及检测结果

          以低亚麻酸甘蓝型油菜20~35d自交种cDNA为模板,高保真扩增了乙酰转移酶基因的2个拷贝,大小均为1350bp。分别对2个靶基因特异片段进行PCR高保真扩增,得到了目的片段长度大小的DNA片段。

          2.2 生物信息学分析

          2.2.1 蛋白质一级结构预测与分析

          以SnapGene3.2.1分别对AT基因翻译出来的氨基酸序列,通过ExPASy-ProtParamtool进行理化性质分析表明(表3),AT基因的2个拷贝114与148氨基酸均为449个,分子量约50.5ku,114编码的氨基酸偏中性而148编码的蛋白偏碱性。不稳定系数显示114与148均为稳定蛋白,且亲水性较差,属于脂溶性蛋白。

          声明:本文所用图片、文字来源《华北农学报》,版权归原作者所有。如涉及作品内容、版权等问题,请与本网联系

          相关链接:油菜乙酰辅酶A亚麻酸大肠杆菌

          休闲
          分享到朋友圈
          收藏
          收藏
          评分
          评论

          综合评分:

          我的评分

          参与评论(0)

          社区交流公约

          暂无评论,快来抢沙发吧~
          登录后参与评论
          发布评论
          用户社区交流公约

          Xinstall 15天会员特权
          Xinstall是专业的数据分析服务商,帮企业追踪渠道安装来源、裂变拉新统计、广告流量指导等,广泛应用于广告效果统计、APP地推与CPS/CPA归属统计等方面。
          20羽毛
          立即兑换
          超级nice便签砖
          超级超级超级奈斯!
          1000羽毛
          立即兑换
          【新品】办公/外出两用静音充电小电扇
          办公桌必备小电扇!
          2000羽毛
          立即兑换
          休闲
          发表文章514
          确认要消耗 羽毛购买
          一个模型两个漏斗做好拉新活动吗?
          考虑一下
          很遗憾,羽毛不足
          我知道了

          我们致力于提供一个高质量内容的交流平台。为落实国家互联网信息办公室“依法管网、依法办网、依法上网”的要求,为完善跟帖评论自律管理,为了保护用户创造的内容、维护开放、真实、专业的平台氛围,我们团队将依据本公约中的条款对注册用户和发布在本平台的内容进行管理。平台鼓励用户创作、发布优质内容,同时也将采取必要措施管理违法、侵权或有其他不良影响的网络信息。


          一、根据《网络信息内容生态治理规定》《中华人民共和国未成年人保护法》等法律法规,对以下违法、不良信息或存在危害的行为进行处理。
          1. 违反法律法规的信息,主要表现为:
              1)反对宪法所确定的基本原则;
              2)危害国家安全,泄露国家秘密,颠覆国家政权,破坏国家统一,损害国家荣誉和利益;
              3)侮辱、滥用英烈形象,歪曲、丑化、亵渎、否定英雄烈士事迹和精神,以侮辱、诽谤或者其他方式侵害英雄烈士的姓名、肖像、名誉、荣誉;
              4)宣扬恐怖主义、极端主义或者煽动实施恐怖活动、极端主义活动;
              5)煽动民族仇恨、民族歧视,破坏民族团结;
              6)破坏国家宗教政策,宣扬邪教和封建迷信;
              7)散布谣言,扰乱社会秩序,破坏社会稳定;
              8)宣扬淫秽、色情、赌博、暴力、凶杀、恐怖或者教唆犯罪;
              9)煽动非法集会、结社、游行、示威、聚众扰乱社会秩序;
              10)侮辱或者诽谤他人,侵害他人名誉、隐私和其他合法权益;
              11)通过网络以文字、图片、音视频等形式,对未成年人实施侮辱、诽谤、威胁或者恶意损害未成年人形象进行网络欺凌的;
              12)危害未成年人身心健康的;
              13)含有法律、行政法规禁止的其他内容;


          2. 不友善:不尊重用户及其所贡献内容的信息或行为。主要表现为:
              1)轻蔑:贬低、轻视他人及其劳动成果;
              2)诽谤:捏造、散布虚假事实,损害他人名誉;
              3)嘲讽:以比喻、夸张、侮辱性的手法对他人或其行为进行揭露或描述,以此来激怒他人;
              4)挑衅:以不友好的方式激怒他人,意图使对方对自己的言论作出回应,蓄意制造事端;
              5)羞辱:贬低他人的能力、行为、生理或身份特征,让对方难堪;
              6)谩骂:以不文明的语言对他人进行负面评价;
              7)歧视:煽动人群歧视、地域歧视等,针对他人的民族、种族、宗教、性取向、性别、年龄、地域、生理特征等身份或者归类的攻击;
              8)威胁:许诺以不良的后果来迫使他人服从自己的意志;


          3. 发布垃圾广告信息:以推广曝光为目的,发布影响用户体验、扰乱本网站秩序的内容,或进行相关行为。主要表现为:
              1)多次发布包含售卖产品、提供服务、宣传推广内容的垃圾广告。包括但不限于以下几种形式:
              2)单个帐号多次发布包含垃圾广告的内容;
              3)多个广告帐号互相配合发布、传播包含垃圾广告的内容;
              4)多次发布包含欺骗性外链的内容,如未注明的淘宝客链接、跳转网站等,诱骗用户点击链接
              5)发布大量包含推广链接、产品、品牌等内容获取搜索引擎中的不正当曝光;
              6)购买或出售帐号之间虚假地互动,发布干扰网站秩序的推广内容及相关交易。
              7)发布包含欺骗性的恶意营销内容,如通过伪造经历、冒充他人等方式进行恶意营销;
              8)使用特殊符号、图片等方式规避垃圾广告内容审核的广告内容。


          4. 色情低俗信息,主要表现为:
              1)包含自己或他人性经验的细节描述或露骨的感受描述;
              2)涉及色情段子、两性笑话的低俗内容;
              3)配图、头图中包含庸俗或挑逗性图片的内容;
              4)带有性暗示、性挑逗等易使人产生性联想;
              5)展现血腥、惊悚、残忍等致人身心不适;
              6)炒作绯闻、丑闻、劣迹等;
              7)宣扬低俗、庸俗、媚俗内容。


          5. 不实信息,主要表现为:
              1)可能存在事实性错误或者造谣等内容;
              2)存在事实夸大、伪造虚假经历等误导他人的内容;
              3)伪造身份、冒充他人,通过头像、用户名等个人信息暗示自己具有特定身份,或与特定机构或个人存在关联。


          6. 传播封建迷信,主要表现为:
              1)找人算命、测字、占卜、解梦、化解厄运、使用迷信方式治病;
              2)求推荐算命看相大师;
              3)针对具体风水等问题进行求助或咨询;
              4)问自己或他人的八字、六爻、星盘、手相、面相、五行缺失,包括通过占卜方法问婚姻、前程、运势,东西宠物丢了能不能找回、取名改名等;


          7. 文章标题党,主要表现为:
              1)以各种夸张、猎奇、不合常理的表现手法等行为来诱导用户;
              2)内容与标题之间存在严重不实或者原意扭曲;
              3)使用夸张标题,内容与标题严重不符的。


          8.「饭圈」乱象行为,主要表现为:
              1)诱导未成年人应援集资、高额消费、投票打榜
              2)粉丝互撕谩骂、拉踩引战、造谣攻击、人肉搜索、侵犯隐私
              3)鼓动「饭圈」粉丝攀比炫富、奢靡享乐等行为
              4)以号召粉丝、雇用网络水军、「养号」形式刷量控评等行为
              5)通过「蹭热点」、制造话题等形式干扰舆论,影响传播秩序


          9. 其他危害行为或内容,主要表现为:
              1)可能引发未成年人模仿不安全行为和违反社会公德行为、诱导未成年人不良嗜好影响未成年人身心健康的;
              2)不当评述自然灾害、重大事故等灾难的;
              3)美化、粉饰侵略战争行为的;
              4)法律、行政法规禁止,或可能对网络生态造成不良影响的其他内容。


          二、违规处罚
          本网站通过主动发现和接受用户举报两种方式收集违规行为信息。所有有意的降低内容质量、伤害平台氛围及欺凌未成年人或危害未成年人身心健康的行为都是不能容忍的。
          当一个用户发布违规内容时,本网站将依据相关用户违规情节严重程度,对帐号进行禁言 1 天、7 天、15 天直至永久禁言或封停账号的处罚。当涉及欺凌未成年人、危害未成年人身心健康、通过作弊手段注册、使用帐号,或者滥用多个帐号发布违规内容时,本网站将加重处罚。


          三、申诉
          随着平台管理经验的不断丰富,本网站出于维护本网站氛围和秩序的目的,将不断完善本公约。
          如果本网站用户对本网站基于本公约规定做出的处理有异议,可以通过「建议反馈」功能向本网站进行反馈。
          (规则的最终解释权归属本网站所有)

          我知道了
          恭喜你~答对了
          +5羽毛
          下一次认真读哦
          成功推荐给其他人
          + 10羽毛
          评论成功且进入审核!审核通过后,您将获得10羽毛的奖励。分享本文章给好友阅读最高再得15羽毛~
          (羽毛可至 "羽毛精选" 兑换礼品)
          好友微信扫一扫
          复制链接